4-Nitrofenylo beta-D-galaktopiranozyd CAS:200422-18-0

Działanie: ONPG to substrat specjalnie stosowany do wykrywania obecności i aktywności enzymu β-galaktozydazy. Obecność i aktywność enzymu β-galaktozydazy powoduje rozszczepienie ONPG na dwa produkty: o-nitrofenol i pochodną galaktozy. Uwolnienie o-nitrofenolu powoduje zmianę koloru na żółty, którą można zmierzyć za pomocą spektrofotometru.

Zastosowanie: ONPG ma szereg zastosowań w badaniach biologii molekularnej i biochemii:

Oznaczanie aktywności β-galaktozydazy: ONPG jest powszechnie stosowany do pomiaru i ilościowego określania aktywności enzymu β-galaktozydazy. Szybkość tworzenia o-nitrofenolu, która jest wprost proporcjonalna do aktywności enzymu, można zmierzyć spektrofotometrycznie.

Ekspresja i regulacja genów: ONPG jest często wykorzystywany w eksperymentach związanych z badaniami ekspresji i regulacji genów. Jest również często stosowany w testach białek fuzyjnych, takich jak powszechnie stosowany system fuzyjny lacZ, do badania ekspresji genów kontrolowanych przez specyficzne promotory. Aktywność beta-galaktozydazy mierzona za pomocą ONPG pozwala określić poziom ekspresji genów.

Badanie aktywności β-galaktozydazy: ONPG może być stosowany jako kolorymetryczna metoda przesiewowa w technologii rekombinacji DNA w celu identyfikacji obecności i funkcjonalności genu LacZ, który koduje β-galaktozydazę. Ta metoda przesiewowa pomaga w identyfikacji klonów zawierających interesujący gen.

Badania kinetyki enzymów: ONPG jest również użyteczny w badaniu kinetyki enzymu β-galaktozydazy. Mierząc szybkość reakcji enzym-substrat przy różnych stężeniach substratu, można określić parametry kinetyczne, takie jak stałe Michaelisa-Mentena (Km) i maksymalne szybkości reakcji (Vmax).