4-nitrofenylo-beta-D-galaktopiranozyd CAS:200422-18-0

Działanie: ONPG jest substratem specjalnie stosowanym do wykrywania obecności i aktywności enzymu β-galaktozydazy.Gdy enzym β-galaktozydaza jest obecny i aktywny, rozszczepia ONPG na dwa produkty: o-nitrofenol i pochodną galaktozy.Uwolnienie o-nitrofenolu powoduje zmianę żółtego zabarwienia, którą można zmierzyć za pomocą spektrofotometru.

Zastosowanie: ONPG ma kilka zastosowań w badaniach z zakresu biologii molekularnej i biochemii:

Oznaczanie aktywności β-galaktozydazy: ONPG jest powszechnie stosowany do pomiaru i ilościowego oznaczania aktywności enzymu β-galaktozydazy.Szybkość tworzenia o-nitrofenolu, która jest wprost proporcjonalna do aktywności enzymu, można zmierzyć spektrofotometrycznie.

Ekspresja i regulacja genów: ONPG jest często wykorzystywana w eksperymentach związanych z badaniami ekspresji i regulacji genów.Jest często stosowany w testach białek fuzyjnych, takich jak powszechnie stosowany system fuzyjny lacZ, do badania ekspresji genów pod kontrolą specyficznych promotorów.Aktywność beta-galaktozydazy mierzona za pomocą ONPG zapewnia wgląd w poziom ekspresji genów.

Badania przesiewowe pod kątem aktywności β-galaktozydazy: ONPG można stosować jako kolorymetryczną metodę przesiewową w technologii rekombinacji DNA w celu identyfikacji obecności i funkcjonalności genu LacZ kodującego β-galaktozydazę.Ta metoda przesiewowa pomaga w identyfikacji klonów zawierających gen będący przedmiotem zainteresowania.

Badania kinetyki enzymów: ONPG jest również przydatny w badaniu kinetyki enzymu β-galaktozydazy.Mierząc szybkość reakcji enzym-substrat przy różnych stężeniach substratu, można określić parametry kinetyczne, takie jak stałe Michaelisa-Mentena (Km) i maksymalne szybkości reakcji (Vmax).