Jak określić optymalne stężenie?
W przypadku induktora IPTG (izopropylo-beta-d-tiogalaktozyd) im wyższe stężenie, tym lepiej.Optymalne stężenie zależy od konkretnych warunków doświadczalnych i pożądanego efektu indukcji.
Ogólnie, stężenie IPTG stosuje się w zakresie 0,1-1 mM.Niższe stężenia mogą zmniejszyć niekorzystny wpływ na wzrost komórek i mogą zmniejszyć cytotoksyczność z powodu nadekspresji białek docelowych.Wyższe stężenia mogą powodować nadmierne obciążenie metaboliczne komórek, wpływając na wzrost komórek i wydajność ekspresji.
Sposobem na określenie optymalnego stężenia może być ocena poziomu ekspresji docelowego białka poprzez przeprowadzenie testów indukcji IPTG przy różnych stężeniach.Testy hodowli na małą skalę można przeprowadzić przy użyciu zakresu stężeń IPTG (np. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM itd.), a efekt ekspresji przy różnych stężeniach można ocenić poprzez wykrywanie poziomu ekspresji docelowego białka (np. Western blot lub detekcja fluorescencji).Zgodnie z wynikami eksperymentów, jako stężenie optymalne wybrano stężenie zapewniające najlepszy efekt ekspresji.
Ponadto można także skorzystać z odpowiedniej literatury lub doświadczeń innych laboratoriów, aby zrozumieć powszechnie stosowany zakres stężeń IPTG w podobnych warunkach eksperymentalnych, a następnie zoptymalizować i dostosować zgodnie z potrzebami eksperymentalnymi.
Należy zauważyć, że optymalne stężenie może się różnić w zależności od różnych systemów ekspresyjnych, białek docelowych i warunków eksperymentalnych, dlatego optymalizację najlepiej jest przeprowadzać indywidualnie dla każdego przypadku.
Czas publikacji: 28 września 2023 r